中藥材從種植、生產、流通的全過程周期較長，控制不當易受真菌毒素危害，再加上真菌毒素的產生與宿主基質特性密切相關，不同類型中藥材會產生種類和性質各異的真菌毒素，方位加強中藥材中真菌毒素污染水平監(jiān)控成為《中國藥典》2020版的重中之重。

2020版《中國藥典》6月正式發(fā)布，自該標準發(fā)布以來，中藥分析檢測工作者面臨了一系列的挑戰(zhàn)。為了宣貫2020年《中國藥典》的變化，上海安譜實驗科技股份有限公司開展“2020年中國藥典標準解讀以及中藥檢測分析技術”專題培訓班。針對此次培訓，今天小編整理了老師們關注有關真菌毒素檢測的八大熱點問題。

01 

Q:黃曲mei素檢測有哪些注意事項？怎么樣才能使測試結果更加準確可靠？

A:在測試黃曲mei素的時候需要注意如下幾點，這樣能保證測試的準確性。

（1）取樣一定要均勻，對于性質特殊的供試品，可適當調整取樣量，像地龍比較粘稠的可以適當調整取樣量，不過一般應不低于5g；

（2）正確的測試免疫親和柱，可測柱回收率，考察免疫親和柱的性能；

（3）采用第yi法液相色譜法測定結果超出限度時，應采用第二法液相色譜串聯(lián)質譜法進行確認；

（4）進行真菌毒素檢測時，實驗室應有相應的安全防護措施，不得污染環(huán)境；黃曲霉du素的毒性很強，需要采取必要的安全措施。建議設用單獨的實驗室和實驗器材，不與別的實驗一起混用；

（5）殘留有黃曲霉du素的廢液或者廢渣的玻璃器皿，應置于儲存容器（裝有10%次氯酸奶溶液）內，浸泡24h以上，再用清水將玻璃器皿清洗干凈。

02 

Q:真菌毒素實驗的過程中使用的對照品有什么要求？

A:（1）對照物質應能夠溯源量值，shou選使用法定標準物質；

（2）很多品種為劇du品，使用時應加強安全防護；

（3）一般情況下不推薦使用固體純品，已知濃度的標準物質溶液（或混合溶液）在痕量分析中使用更為方便，也更為廣泛；

（4）針對很多劇毒成分，如黃曲霉du素，使用標準物質溶液也能夠有效減少對檢驗人員的安全風險。通常，首先配置成1-100ug/ml的濃溶液，作為儲備液使用。儲備液可保存在惰性，密封，避光，低溫環(huán)境下。儲備液的濃度，溶劑，配制日期應詳細記錄，并在原始記錄中明確顯示，以便于溯源。儲備液的有效期應根據(jù)穩(wěn)定性測試數(shù)據(jù)確定。

03

Q:中藥中痕量殘留量檢測分析中空白實驗怎么防止污染與干擾？

A:防止污染與干擾是痕量分析質量控制的重要內容：

（1）避免交叉污染：樣品儲存需要采用通過密封或者分開放置等方式防止樣品之間，防止樣品之間，樣品與潛在污染源之間的互相污染；實驗室器皿建議，檢測所使用的器皿應有針對性的仔細清洗，尤其需要避免標準物質，高濃度陽性樣品與普通樣品間的交叉污染。實驗試劑應選擇適宜純度，并通過使用瓶口分液器等方式減少試劑瓶多次開啟造成的試劑被污染。

（2）日常質控要求：每次檢測均應隨行空白實驗，即不取樣，*按照供試品溶液制備程序操作并測定，以便反應試劑，器皿，環(huán)境對測定的干擾情況。當空白實驗干擾峰峰面積（響應值）不高于較準曲線濃度低點峰面積（響應值）的1/2時，可認為無干擾。在試驗操作過程中，通常按照空白實驗，樣品測定，回收試驗的順序操作，嚴格避免交叉污染。

04

Q:使用免疫親和柱的注意事項有哪些？樣品的PH在什么范圍時柱效是hao的？

A:在過免疫親和柱之前如果溶液不夠澄清的話，需要用離心或者玻璃濾紙過濾的方法使溶液澄清后再過免疫親和柱。建議使用前仔細閱讀使用的注意事項比如可冷藏不能冷凍，注意使用親和柱（shi合的PH值6-8）的時候先測一下樣品的PH值，是中性的話柱效果是hao的。在進行回收率考察的時候先進行柱回收率的考察，把適當?shù)狞S曲mei素的混合標準溶液先通過免疫親和柱后進行測試，考察一下免疫親和柱的性能，再考察整體的回收率。

05

Q:檢測限的確定需要做什么工作?準確度和精密度嗎？檢測限的概念是應該是定量限嗎？

A:檢測限（報告限）是指殘留量被作為數(shù)值報告的低濃度。檢測限一般等于或略高于低較準濃度，具有可接受的準確度和精密度，是高于實際方法定量限的一個固定數(shù)值。

當MPL（大殘留量）≥0.1mg/kg時，檢測限應<1/10MRL；當MPL<0.1mg/kg時，檢測限應≤1/3MRL。由于檢測限的設定，檢驗人員不必每一次進行樣品分析時都嚴格進行LOQ測定，可以節(jié)省很多人力物力；同一體系內部的各實驗室間針對同一方法也可以設定一致的檢測限，這樣一來出具的報告具有了可比性，也便于統(tǒng)計分析，發(fā)布結果。

06

Q:黃曲mei毒素方法驗證中檢出限怎么做？

A:關于檢出限的概念容易混淆，檢出限有儀器檢出限和方法檢出限兩種。儀器檢出限僅僅反應的是檢測系統(tǒng)的響應，通常把標準品稀釋用3倍的信噪比的進樣量來表示。方法的檢出限應該是在空白基質中定量的加入對照品，后按照供試品的提取方法進行提取，然后進行檢測分析，獲得1/10的信噪比。對應的加入的對照品的濃度就是方法的檢出限。在20版在做黃曲霉mei毒素的測定實驗時，建議做儀器的檢出限，然后再折算成樣品的檢出限。

07

Q:不同基質的中藥材中真菌毒素的檢測有什么不同？會因為基質不同而出現(xiàn)結果的差異嗎？

A:基質效應的影響因子是根據(jù)基質效應因子進行判斷的，基質效應是指在對分析物的濃度或質量測定過程中，來自樣品中其它化合物的一種或者幾種綜合的影響?；|因子是指空白樣品溶液加標測定值與純溶劑配制同樣濃度標準品溶液測定值的比值。機制效應的評定采用的機制因子進行評定的。不同品種，不同成分，基質影響不同，有普遍偏低現(xiàn)象。如果機制效應因子在85%-115%之間說明機制效應在不同的方法不存在顯著差異，不同的品種不同的材質機制效應是不同的。按照通則去做，不同基質在液質上會有基質干擾，這個干擾的大小會因為基質不同而不同，實驗過程中需要針對不同基質做一些方法上的改進。例如地龍按藥典沒辦法提取，需要進行一些實驗的優(yōu)化和調整的。

08

Q:怎么做一條好的校準曲線？

A:校正曲線是用于描述待測物質的濃度或量與相應的測量儀器的響應量或其他指示量之間的定量關系的曲線。校準曲線的制定需要滿足以下條件：線性范圍在檢測器jia響應范圍內；一般要求，低校準濃度（CL）所對應的樣品中待測物濃度應≤1/10MRL（當MRL≥0.1mg/kg時），或≤1/3MRL（MRL<0.1mg/kg時）。大殘留*（MRL）所對應的供試品速溶濃度應在校準曲線的中間或偏上濃度位置；gao校準濃度可根據(jù)樣品中待測物的可能殘留量及儀器的線性檢測能力設置為MRL的2-10倍；線性范圍一般無需強制通過原點，校準曲線相關系數(shù)一般不低于0.990；當線性范圍超過1個數(shù)量級時，可使用分段校準或采用加權校準的方式，測量誤差小于簡單的線性校準；完成樣品測定或每完成一定批次樣品分析后，應再次分析校準曲線中的代表性濃度標準溶液（如MRL對應的濃度點），響應值和校準曲線偏差應在±15%以內。